はじめに

　　環境化学物質・紫外線・電離放射線その他による外因性活性酸素やライフスタイルの乱れなどにより生じる内因性活性酸素は、DNAに損傷を生じ、癌や生活習慣病を引き起こすと考えられている。中でもDNAの酸化損傷の一つである8-ヒドロキシデオキシグアノシン(8-OH-dG, 8-OHdG, 8OHdG, 8-oxo-dG, 8-oxodG, 8oxodGとも表記)(1)は、細胞に突然変異を起こすことから広く研究されている。これまでに発表された8-OH-dGに関する論文数は、2000報(尿中8-OH-dGは280報)を超えており、年々研究者の数が増えていることがうかがえる。増加の理由として、DNA修復酵素OGG1、ヌクレオチド浄化酵素MTH1がヒトや動物細胞に普遍的に存在することが確認され、生物学的意義が高まったこと、HPLCによる生体試料中の8-OH-dG分析法が改善されたことなどが挙げられる。

　　動物実験では、例えばディーゼル排気微粒子１(DEP)(1)、カドミウム(+グルタチオン枯渇)、アゾ色素系発癌物質3'-MeDAB、エタノール(+栄養欠乏食)、アスベスト、6価クロム投与により、それぞれの発癌標的臓器においてDNA中の8-OH-dGの上昇が見られた。

　　ヒトでは現在、尿(2)や白血球DNA中の8-OH-dGの分析、OGG1遺伝子多型の解析から、疫学との接点で盛んに研究が行われている。ヒト白血球DNAの分析から、適度な運動は8-OH-dGを下げ、ストレスは8-OH-dGを増加させることが分かった(3)。また、癌患者は高い尿中8-OH-dG値を示す(4)。さらに、大腸癌(男性、リンパ球)(5)、小児癌(未熟児、尿)(6)、慢性肝炎(尿)(7)、糖尿病(尿、白血球)(8,9)、冠動脈疾患(白血球)(5)、アルツハイマー病(尿)(10)、アトピー性皮膚炎(尿)に関して、8-OH-dGの増加が報告されている。喫煙(12)、飲酒(7)も8-OH-dG値を上昇(尿)させる。特にOGG1活性の低いタイプ(Cys-Cys型)の人は、飲酒、喫煙によりは癌率が高まる(13)。これに対して、ビタミンE、C、β-カロチン、クルクミン(14)、緑茶(15)、赤ワイン、トマトソース(16)、芽キャベツ摂取による、白血球DNA中、あるいは尿中8-OH-dGの低下が報告されている。

　　このように8-OH-dGは酸化ストレスマーカーとして高く評価されつつあるが、一方で、その分析はかなり難しい面もある。今後、ヒト試料の8-OH-dG測定による環境汚染物質のリスク評価、あるいは生活習慣病の診断がなされる場合、分析の精度管理はきわめて重要になってくるであろう。　

参考文献

  (1). Kasai, H. et al. : Carcinogenesis, 7, 1849 (1986).

  (2). Tsurudome, Y. et al. : Carcinogenesis, 20, 1573 (1999).

  (3). Sato Y. et al. : Biochem Biophys Res Commun. 305, 333 (2003).

  (4). Loft, S. & Poulsen, H. E. : J. Mol. Med., 74, 297 (1996).

  (5). Collins, A. R. et al. : FASEB J., 12, 1397 (1998).

  (6). Matsubasa T. et al. : Free Radic. Res., 36, 189 (2002).

  (7). Wong, R. H. et al. : Mutat. Res., 535, 181 (2003).

  (8). Hinokio, Y. : Diabetologia, 45, 877 (2002).

  (9). Nishikawa, T. : Diabetes. Care, 26, 1507 (2003).

(10). Lovell, M. A. & Markesbery, W. R. : Arch. Neurol., 58, 392 (2001).

(11). Tsukahara, H. et al. : Life Sci., 72, 2509 (2003).

(12). Kasai, H. et al. : Jpn. J. Cancer Res., 92, 9 (2001).

(13). Elahi, A. et al. : Carcinogenesis, 23, 1229 (2002).

(14). Inano, H. & Onoda, M. : Int. J. Radiat, Oncol. Biol. Phys., 53, 735 (2002).

(15). Hakim, I. A. et al. : J. Nutr., 133, 3303S (2003).

(16). Chen, L. et al. : J. Natl. Cancer Inst., 93, 1872 (2001).

(17). Kasai, H. et al. : J. Radiat. Res., 44, 185 (2003).

【酸化ストレス】

　生物にはフリーラジカルから自身を守るメカニズムが具わっています。食品中のポリフェノールのような抗酸化物質、SODのような抗酸化酵素などがその例です。通常、生体中の活性酸素のレベルと生体の抗酸化能はバランスが保たれています。このバランスが崩れ、活性酸素のレベルに抗酸化能が追いつかない状態を「酸化ストレス」と呼びます。

【8-OH-dG (8-OH-dG, 8-OHdG, 8OHdG, 8-oxo-dG, 8-oxodG, 8oxodGとも表記)】

　フリーラジカルはDNA、タンパク質、脂質、糖質などさまざまな生体分子に障害を起こします。生体分子のうち最も障害を受けやすい分子の反応物は「酸化ストレスマーカー」と呼ばれます。フリーラジカルによる細胞のダメージを評価する場合、このようなバイオマーカーを測定します。DNAの場合グアニン塩基がフリーラジカルの攻撃を受け易く、活性酸素により8-ヒドロキシデオキシグアノシン(8-OH-dG)が生成します。

【尿中8-OH-dG】

　DNA中の8-OH-dGはDNA修復酵素により切り出され尿中に排泄されます。尿中の8-OH-dGを測定することにより、生体の酸化ストレスの状態を把握します。健常人の尿中8-OH-dGの平均は3.9μg8-OH-dG/gクレアチニンであり、高感度で検出する必要があります。また、尿中には多くの夾雑物質があり検出には高い特異性も求められます。ここで紹介するHPLCシステムではイオン交換カラムと逆相カラムによるカラムスイッチングに加えて、検出にクーロメトリック型電気化学検出器(ECD)を用いることにより尿中8-OH-dG測定に必要な感度と特異性を満たしました。

【本分析法の優位性】

　弊社の開発した装置による8-OHdGの測定は、既存のHPLC法や抗体法(ELISA法)と比べて精度がよく、有用性が高いと考えられます。このことについては、ヨーロッパ標準化委員会(ESCULA)でも議論されており、世界的にも認知され始めています。

【8-OHdG分析のニーズ】
　近年、生活習慣病の予防やアンチエイジングに対する意識が高まっており、8-OHdGの測定による生体酸化ストレス評価のニーズは今後さらに拡大すると思われます。

 8-OH-dG = 8-OHdG= 8OHdG= 8-oxo-dG. 8-OH-dG = 8-OHdG= 8OHdG= 8-oxo-dG.8-OH-dG = 8-OHdG= 8OHdG= 8-oxo-dG. 8-OH-dG = 8-OHdG= 8OHdG= 8-oxo-dG.8-OH-dG = 8-OHdG= 8OHdG= 8-oxo-dG. 8-OH-dG = 8-OHdG= 8OHdG= 8-oxo-dG.8-OH-dG = 8-OHdG= 8OHdG= 8-oxo-dG. 8-OH-dG = 8-OHdG= 8OHdG= 8-oxo-dG.8-OH-dG = 8-OHdG= 8OHdG= 8-oxo-dG. 8-OH-dG = 8-OHdG= 8OHdG= 8-oxo-dG.8-OH-dG = 8-OHdG= 8OHdG= 8-oxo-dG. 8-OH-dG = 8-OHdG= 8OHdG= 8-oxo-dG.8-OH-dG = 8-OHdG= 8OHdG= 8-oxo-dG. 8-OH-dG = 8-OHdG= 8OHdG= 8-oxo-dG.8-OH-dG = 8-OHdG= 8OHdG= 8-oxo-dG.

8-hydroxydeoxyguanosine (8-OH-dG), 8-hydroxyguanosine (8-OH-Gua), 8-hydroxyguanosine (8-OH-Guo). 8-hydroxydeoxyguanosine (8-OH-dG), 8-hydroxyguanosine (8-OH-Gua), 8-hydroxyguanosine (8-OH-Guo). 8-hydroxydeoxyguanosine (8-OH-dG), 8-hydroxyguanosine (8-OH-Gua), 8-hydroxyguanosine (8-OH-Guo). 8-hydroxydeoxyguanosine (8-OH-dG), 8-hydroxyguanosine (8-OH-Gua), 8-hydroxyguanosine (8-OH-Guo). 8-hydroxydeoxyguanosine (8-OH-dG), 8-hydroxyguanosine (8-OH-Gua), 8-hydroxyguanosine (8-OH-Guo). 8-hydroxydeoxyguanosine (8-OH-dG), 8-hydroxyguanosine (8-OH-Gua), 8-hydroxyguanosine (8-OH-Guo). 8-hydroxydeoxyguanosine (8-OH-dG), 8-hydroxyguanosine (8-OH-Gua), 8-hydroxyguanosine (8-OH-Guo). 8-hydroxydeoxyguanosine (8-OH-dG), 8-hydroxyguanosine (8-OH-Gua), 8-hydroxyguanosine (8-OH-Guo). 8-hydroxydeoxyguanosine (8-OH-dG), 8-hydroxyguanosine (8-OH-Gua), 8-hydroxyguanosine (8-OH-Guo).